FlashPure Tissue/Cell Genomic DNA Kit

動(dòng)物組織/細(xì)胞基因組 DNA ti取試劑盒（離心柱型）

組織/細(xì)胞基因組DNA快速提取試劑盒

目錄號(hào):40017

產(chǎn)品內(nèi)容：

自備試劑:

    無水乙chun，RNase A（可選）

保存條件:

    室溫（15~25℃）

    蛋白meiK，室溫可保存 6 個(gè)月，4℃保存 12 個(gè)月，- 20℃保存 2 年。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

    適用于從動(dòng)物組織、培養(yǎng)細(xì)胞中快速提取高質(zhì)量的基因組DNA。

    本試劑盒采用du特的裂解液，利用硅膠膜特異吸附DNA，無需酚氯仿等 有毒試劑，也無需進(jìn)行耗時(shí)的chun類沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性 雜質(zhì)，得到基因組DNA，無蛋白、核酸mei污染，可直接進(jìn)行PCR、mei切和雜 交等相關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn):

1.    簡(jiǎn)便快速：30 min 內(nèi)可獲得高純度的基因組 DNA。

2.   安全無毒：無需苯fen/lv仿抽提。

3.   高純：OD260/280=1.7～1.9，長(zhǎng)度可達(dá) 30～50 kb，可直接進(jìn)行 PCR、 mei切和雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng):

1.    如果裂解液TL、結(jié)合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴 溶解，搖勻后使用。

2.   開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到70℃?zhèn)溆谩?strong>

3.   洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游mei切、連接等反應(yīng)。也可以使 用水洗脫，但應(yīng)該確保批pH大于7.5， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫 DNA應(yīng)該保存在－20℃。DNA如果需要長(zhǎng)期保存，可以用TE緩沖液洗脫 （10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游 mei切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。

操作步驟:

第一次使用前，請(qǐng)先在漂洗液 WB 中加入zhi定量無水乙chun，詳見瓶身的標(biāo)簽。

提示：所有離心步驟必須在室溫（15~25℃）下進(jìn)行。

1.    柱平衡：向吸附柱的膜中央（吸附柱放入收集管中）加入 100μl 平衡液， 12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液，將吸附柱重新放回收集管中。 （請(qǐng)使用當(dāng)天處理過的柱子）

2.    材料處理：

a.     動(dòng)物組織

將動(dòng)物組織在液氮中研磨成細(xì)粉（或者用解剖dao切成小碎塊），取約 25 mg 轉(zhuǎn)入 1.5 ml 離心管中，加入 180 μl 裂解液 TL，再加入 20 μl 蛋白mei K 溶 液，振蕩至che底懸浮，56℃水浴 1~3 小時(shí)，直至組織wan全消化溶解。

推薦樣本投入量：動(dòng)物組織≤25 mg，動(dòng)物脾臟≤10 mg。

鼠尾樣本投入量：大鼠尾巴最大用量為 0.6 cm 長(zhǎng)片段，小鼠鼠尾巴最大 用量為 1.2 cm 長(zhǎng)片段，并將裂解時(shí)間延長(zhǎng)至 6-8 小時(shí)。

注意：水浴過程中，每 10 分鐘顛倒混勻一次，可促進(jìn)細(xì)胞裂解。

b.    培養(yǎng)細(xì)胞

①  105~ 106懸浮細(xì)胞到一個(gè) 1.5 ml 離心管；對(duì)于貼壁細(xì)胞，應(yīng)該先 用胰蛋白mei消化后吹打下來收集。

②  13, 000 rpm 離心 10 sec，吸棄上清，留下細(xì)胞團(tuán)和大約 10~20μl 殘留的液體。

③  加入 200 μl 1× PBS，振蕩至細(xì)胞充分懸浮，洗滌細(xì)胞去除雜質(zhì)， 13, 000 rpm 離心 10 sec，wan全吸棄上清。

④  再次加入 180 μl 1× PBS，振蕩混勻，使細(xì)胞che底懸浮。

⑤  加入 20 μl 蛋白酶 K 溶液，充分混勻。

3.    （可選步驟）加入 5 μl RNase A (100mg/ml) 溶液，振蕩混勻，室溫 放置 5 ~ 10min。

4.     加入200 μl結(jié)合液 CB，充分振蕩混勻，70℃水浴或金屬浴處理10 min。

5.     冷卻后加 100 μl 無水乙醇 (或異丙chun)，充分振蕩混勻，此時(shí)可能會(huì)出 現(xiàn)絮狀沉淀，短暫離心以去除管蓋內(nèi)壁水珠。

6.    將所得溶液和絮狀沉淀加入一個(gè) DNA 吸附柱中，（吸附柱放入收集管中） 13, 000 rpm 離心 1 min，DNA 被吸附在膜上，倒棄濾液。

7.    加入 500 μl 抑制物去除液 IR，13, 000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

8.    加入 600 μl 漂洗液 WB（請(qǐng)檢查是否已加入無水乙chun），13, 000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

9.    重復(fù)步驟 9 一遍。

10.   將 DNA 吸附柱放回空收集管中，13, 000 rpm 離心 2 min，盡量除去 漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙chun抑制下游反應(yīng)。

11.   取出 DNA 吸附柱，放入一個(gè)干凈的 1.5 ml 離心管中，向吸附膜的中央 加入 100 μl 洗脫緩沖液 EB （洗脫緩沖液事先在 80 ~ 100℃水浴中預(yù) 熱可以提高產(chǎn)量）， 室溫放置 3 ~ 5 min，13, 000 rpm 離心 1 min。

12.   DNA 可以存放在 2~ 8℃，如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在-20℃。

相關(guān)產(chǎn)品：

50110-500 10000x GenGreen（同GelGreen） 無毒核酸染料 藍(lán)光切膠儀用

50111-500 10000x GenRed（同GelRed） 無毒核酸染料 凝膠成像儀用

71800-05 2x Lightning Taq PCR MasterMix（含染料） 延伸速度：6 kb/min

71517-05 2x KOD PCR MasterMix（含染料） 擴(kuò)增長(zhǎng)度≤6kb 6 kb/min

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