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琥珀酸脫氫酶試劑盒 三羧酸循環(huán)系列
簡(jiǎn)要描述:

SDH(EC 1.3.5.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。SDH 是線粒體的一種標(biāo)志酶,位于線粒體內(nèi)膜上的一種膜結(jié)合酶,是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。
琥珀酸脫氫酶試劑盒 三羧酸循環(huán)系列

  • 產(chǎn)品型號(hào):BK6005
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間:2025-07-17
  • 訪  問(wèn)  量:312
詳情介紹


琥珀酸脫氫酶(Succinate Dehydrogenase,SDH試劑盒說(shuō)明書

微量法 100 /96 

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

SDH(EC 1.3.5.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。SDH 是線粒體的一種標(biāo)志酶,位線粒體內(nèi)膜上的一種膜結(jié)合酶,是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。此外,為多種原核細(xì)胞產(chǎn)能的呼吸鏈提供電子。

測(cè)定原理:

SDH 催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸,脫下的氫通過(guò)吩嗪二甲酯硫酸(PMS)傳遞還原 2,6-二氯酚靛酚(DCPIP),并且在 600nm 處具有特征吸收峰,通過(guò) 600nm 吸光度的變化,測(cè)定 2.6-DPIP 的還原速度,代表SDH 酶活性。

琥珀酸脫氫酶試劑盒 三羧酸循環(huán)系列

組成:

產(chǎn)品名稱

BK6005-100T/96S

Storage

試劑一:液體

100ml

-20℃

試劑二:液體

20ml

-20℃

試劑三:液體

1.5ml

-20℃

試劑四:粉劑

1

4℃

試劑五:粉劑

1

-20℃

說(shuō)明書

一份

自備儀器和用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。


具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)


樣本的前理:

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

1、 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬(wàn)細(xì)胞,加入 1ml 試劑一和 10μl 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

2、 將勻漿 600g,4℃離心 5min。

3 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心 10min。

4、 上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的 SDH(此步可選做)。

5、 在步驟④的沉淀中加入 200μl 試劑二和 2μl 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3 秒,間 10 秒,重復(fù) 30 次),用于線粒體 SDH 活性測(cè)定。

測(cè)定步驟和加樣表:

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 600nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定

(1) 在試劑四中加入 18ml 蒸餾水充分溶解,置于 37℃(哺乳動(dòng)物) 25℃(其它物種)水浴 10min;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;

(2) 在試劑五中加入 1ml 蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;

(3) 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μl 樣本、10μl 試劑五和 180μl 試劑四,混勻,立即記錄 600nm 20s 時(shí)的吸光值A1  1min20s 后的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。

SDH 活性的計(jì)算:

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:每mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。 SDH 活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V ) ÷T=952×ΔA÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:每g 組織每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。

SDH 活性(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=192×ΔA÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義:每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。 SDH 活性(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.385×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù),2.1×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 ml;

V 樣總:加入提取液體積,0.202 ml;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬(wàn)。

b.  96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:每mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。 SDH 活性(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1904×ΔA÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:每g 組織每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。

SDH 活性(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=384×ΔA÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義:每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。 SDH 活性(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.77×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù),2.1×104 L / mol /cm;d:96 孔板光徑,0.5cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 ml;V 樣總:加入提取液體積,0.202 ml;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬(wàn)。

琥珀酸脫氫酶試劑盒 三羧酸循環(huán)系列



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