糖化酶(Glucoamylase)試劑盒說(shuō)明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

糖化酶，即葡萄糖淀fen酶（EC3.2.1.3），又稱γ-淀fen酶，是一種外切型糖苷酶，它從淀粉的非還原性末端水解α-1,4 糖苷鍵和α-1,6 糖苷鍵，將淀粉wan全水解為葡萄糖，因此廣泛的應(yīng)用于酒精、白酒、抗生素、氨基酸、有機(jī)酸，甘油，淀粉糖等工業(yè)中，是我國(guó)重要的工業(yè)酶制劑之一。

測(cè)定原理：

糖化酶水解可溶性淀粉生成葡萄糖，與 3,5-二硝基水楊酸生成紅棕色化合物，在 540nm 處有最大光吸收，在一定范圍內(nèi)反應(yīng)液顏色深淺與葡萄糖的量成正比，可測(cè)定計(jì)算得糖化酶的活力。

糖化酶(Glucoamylase)試劑盒   糖代謝系列

組成：

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 ml 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

酶液提取：

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1ml 提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。

2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 4℃，10000g離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 培養(yǎng)液或其它液體：直接檢測(cè)。

測(cè)定操作：

酶活性計(jì)算公式：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.2164x - 0.0182，R² = 0.9992

1. 按照蛋白含量計(jì)算

酶活性定義：在 40℃，pH4.6 條件下，每毫克蛋白每分鐘分解可溶性淀粉產(chǎn)生 1mg 葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

糖化酶活性（U/mg prot）=（△A+0.0182）÷ 0.2164×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T

= 2.54×（△A+0.0182）÷ Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：在 40℃，pH4.6 條件下，每克組織每分鐘分解可溶性淀粉產(chǎn)生 1mg 葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

糖化酶活性（U/g 鮮重）=（△A+0.0182）÷ 0.2164×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T

= 2.54×（△A+0.0182）÷ W

3. 按照液體體積計(jì)算

酶活性定義：在 40℃，pH4.6 條件下，每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解可溶性淀粉產(chǎn)生 1mg 葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

糖化酶活性（U/ml）=（△A+0.0182）÷ 0.2164×V 反總÷V 樣÷T

= 2.54×（△A+0.0182）

4. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義：在 40℃，pH4.6 條件下，每 10⁴ 個(gè)細(xì)胞每分鐘分解可溶性淀粉產(chǎn)生 1mg 葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

糖化酶活性（U/10⁴cell）=（△A+0.0182）÷ 0.2164×V 反總÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）÷V 樣總）÷T

= 2.54×（△A+0.0182）÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

V 反總：反應(yīng)總體積，0.55ml，V 樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.05ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；

Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min

注意事項(xiàng)：

1. 滅活樣本的制備建議將樣本放在沸水浴中煮沸 10min，以將酶徹di滅活。

2. 測(cè)定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，若吸光值較高，請(qǐng)將樣品用提取液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

糖化酶(Glucoamylase)試劑盒   糖代謝系列