乙醛脫氫酶（acetaldehyde dehydrogenase，ALDH）試劑盒說明書

微量法100T/96S

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

乙醛脫氫酶 (EC 1.2.1.10)是醛脫氫酶的一種，廣泛存在于各種動(dòng)物、植物和微生物體內(nèi)。主要作用是將乙醛氧化成乙酸，在酒精代謝中起主要作用。在人類和許多動(dòng)物體內(nèi)，線粒體乙醛脫氫酶能把對(duì)生物體有害的醇類轉(zhuǎn)化，所以在細(xì)胞解毒研究中乙醛脫氫酶受到高度關(guān)注；同時(shí)，乙醛脫氫酶在分子生物學(xué)以及相關(guān)疾病的檢測(cè)方面有較廣泛的研究應(yīng)用。

測(cè)定原理：

在輔酶Ⅰ存在的條件下，乙醛脫氫酶催化乙醛和 NAD+轉(zhuǎn)化為乙酸和NADH，在 340nm 處的吸光值會(huì)增加，測(cè)定 340nm 處的吸光值變化，可計(jì)算得到乙醛脫氫酶的活性。

組成：

自備儀器和用品：

天平、離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水。

ALDH 提取:

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃，離心 20min。

2、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3、液體：直接檢測(cè)。

測(cè)定操作表:

1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm。

2、操作表

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1）按蛋白濃度計(jì)算

酶活定義：每毫克蛋白每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個(gè)酶活單位。ALDH 酶活（nmol/min/mg prot）=

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算

DA ×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T = 804×△A÷Cpre′ d酶活定義：每克樣品每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個(gè)酶活單位。ALDH 酶活（nmol/min/g 鮮重）=

（3）按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

DA ×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）÷T= 804×△A÷We′ d酶活定義：每 104 個(gè)細(xì)胞每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個(gè)酶活單位。ALDH 酶活（nmol/min/104cell）=數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

（4）按液體體積計(jì)算

DA ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)））÷T= 804×△A÷細(xì)胞e′ d酶活定義：每ml 樣本每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個(gè)酶活單位。ALDH 酶活（nmol/min/ml）=DA ×V 反總÷V 樣÷T= 804×△A e′ de：NADH 微摩爾消光系數(shù)，6.22×10-3 L/µmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml； V 樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.04ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，gb. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1）按蛋白濃度計(jì)算

酶活定義：每毫克蛋白每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個(gè)酶活單位。ALDH 酶活（nmol/min/mg prot）=

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算

DA ×V 反總÷（V 樣×Crp）÷T = 1608×△A÷Cpre′ d酶活定義：每克樣品每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個(gè)酶活單位。ALDH 酶活（nmol/min/g 鮮重）=

（3）按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

DA ×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）÷T = 1608×△A÷W e′ d酶活定義：每 104 個(gè)細(xì)胞每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個(gè)酶活單位。ALDH 酶活（nmol/min/104cell）=胞數(shù)量

（4）按液體體積計(jì)算

DA ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)））÷T= 1608×△A÷細(xì)e′ d酶活定義：每ml 樣本每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個(gè)酶活單位。ALDH 酶活（nmol/min/ml）=DA ×V 反總÷V 樣÷T= 1608×△A e′ de：NADH 微摩爾消光系數(shù)，6.22×10-3 L/µmol/cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；V 反總：反應(yīng)體系總體積， 0.2ml；V 樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.04ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml； W：樣本質(zhì)量，g