諾博萊德 AO染色液(1mg/ml)AO Stain Solution

AO染色液(1mg/ml)   細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法

產(chǎn)品貨號(hào)：CA9921

產(chǎn)品名稱(chēng)：AO染色液(1mg/ml)AO Stain Solution

英文名稱(chēng)：AO Stain Solution

產(chǎn)品規(guī)格：10ml

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

儲(chǔ)存條件：2-8℃，避光，有效期6個(gè)月。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyderCA9921 AO染色液(1mg/ml)AO Stain Solution屬于三環(huán)雜芳香燃料，可以標(biāo)記DNA、RNA，屬于異染性熒光染料。該染料具有膜通透性，能透過(guò)細(xì)胞膜，使核DNA和RNA染色。因此AO常用于細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA進(jìn)行檢測(cè)。AO與核酸結(jié)合方式主要有：1、插入性結(jié)合，AO嵌入核酸雙鏈的堿基對(duì)之間，這種結(jié)合方式主要為AO與DNA的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為530nm，激發(fā)后呈綠色熒光；2、靜電吸引，帶正電荷的AO與單鏈核酸的磷酸根(帶負(fù)電荷)產(chǎn)生靜電間的吸引結(jié)合，這種結(jié)合方式主要為AO與RNA的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為640nm，激發(fā)后呈紅色熒光，少量結(jié)合會(huì)呈桔黃色或桔紅色熒光。因此，AO嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色，與DNA單鏈或RNA結(jié)合時(shí)發(fā)桔黃色或橙紅色熒光。

AO染色液(1mg/ml)為儲(chǔ)存液，使用時(shí)應(yīng)稀釋到合適濃度后使用。染色后在熒光顯微鏡下觀(guān)察，AO可透過(guò)正常細(xì)胞膜，使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細(xì)胞中，因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。AO使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片顆粒；而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。AO染色常與EB染色合用雙染，因EB只染死細(xì)胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光，由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。

自備材料：

1、熒光顯微鏡

2、低速離心機(jī)

3、PBS

 4、細(xì)胞計(jì)數(shù)板

5、載玻片、蓋玻片

操作步驟(僅供參考)：

1、收集細(xì)胞(采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，應(yīng)先固定細(xì)胞)，用PBS清洗細(xì)胞1次，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至106/ml。

2、取適量的細(xì)胞懸液，加入AcridineOrangeStain(1mg/ml)，使AO終濃度為8.5～17μg/ml，輕輕混勻。

3、室溫避光染色15～20min，滴加于載玻片上并加蓋玻片或上流式細(xì)胞儀分析。

4、熒光顯微鏡下觀(guān)察(激發(fā)濾光片波長(zhǎng)488nm，阻斷濾光片波長(zhǎng)515nm)，計(jì)數(shù)并拍照。

染色結(jié)果

正常細(xì)胞：細(xì)胞被均勻染成黃綠色熒光

凋亡細(xì)胞：染色質(zhì)濃縮，細(xì)胞核碎裂成點(diǎn)狀，被染成大小不一、致密濃染的綠色顆粒

注意事項(xiàng)：

1、Acridine Orange Stain(1mg/ml)不含破膜劑，較少單獨(dú)使用。

2、AO常與EB染色合用，可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。

3、如有低溫離心機(jī)進(jìn)行離心效果更佳。

4、操作過(guò)程中應(yīng)注意減少試劑暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。

5、試劑有一定毒性，請(qǐng)小心操作。

6、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

AO染色液(1mg/ml)   細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法

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CA9921 AO染色液(1mg/ml)AO Stain Solution  10ml