諾博萊德 DB3.1 感受態(tài)細(xì)胞

 DB3.1 感受態(tài)細(xì)胞   載體構(gòu)建

產(chǎn)品貨號(hào)：C9258

產(chǎn)品名稱：DB3.1 感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格：20*100ul/10*100ul

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

儲(chǔ)存條件：-70℃

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyderC9258 DB3.1 感受態(tài)細(xì)胞的大腸桿菌DB3.1細(xì)胞含有g(shù)yrA462基因，對(duì)λ噬菌體的ccdB基因產(chǎn)物的毒性具有抵抗作用，特別適用于轉(zhuǎn)化和擴(kuò)增包含ccdB基因的質(zhì)粒載體。使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)107cfu/µg。

基因型:

F-gyrA462endA1Δ(sr1-recA)mcrBmrrhsdS20(rB-,mB-)supE44ara-14galK2lacY1proA2rpsL20(SmR )xyl-5λ-leumtl1

抗生素耐藥性：細(xì)胞具有鏈mei素抗性。

操作方法：（以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）

1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無(wú)菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。

2. 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30分鐘。

3. 將離心管置于42℃水浴中放置60秒鐘，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2分鐘，該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。

4. 向每個(gè)離心管中加入500μL無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃150rpm，搖床振蕩培養(yǎng)60分鐘，目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。

5. 無(wú)菌條件下，取適量菌液加到含相應(yīng)抗生素的LB固體培養(yǎng)基平板上，用無(wú)菌的細(xì)菌涂布器或玻璃珠將細(xì)胞均勻涂開。等平板中的液體wan全吸收后，倒置平板，37℃培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。

6. 保留剩余的菌液于4℃冰箱中，視平板上菌落生長(zhǎng)情況決定去留。

注意事項(xiàng)：

1．感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃，不可反復(fù)凍融，否則其轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。

2．實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來(lái)影響。

3．轉(zhuǎn)化時(shí)，轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源DNA量過(guò)多或體積過(guò)大反而會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時(shí)DNA體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。

4．轉(zhuǎn)化率的計(jì)算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。

5．為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到*低。

 DB3.1 感受態(tài)細(xì)胞   載體構(gòu)建

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C9258 DB3.1 感受態(tài)細(xì)胞  20*100ul/10*100ul