諾博萊德 凍存樣本核蛋白提取試劑盒

凍存樣本核蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號：P5036

產(chǎn)品名稱：凍存樣本核蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：凍存樣本核蛋白提取試劑盒

規(guī)格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5036 凍存樣本核蛋白提取試劑盒

核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代動物細(xì)胞和各種動物實(shí)體組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等動物組織中提取核蛋白和胞漿蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內(nèi)完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞核膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、免疫共沉淀、酶活性測定等蛋白研究。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

適用樣本：動物組織

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

產(chǎn)品簡介：

核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代動物細(xì)胞和各種動物實(shí)體組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等動物組織中提取核蛋白和胞漿蛋白。提取過程簡單方便，可在 1 小時內(nèi)完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞核膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、免疫共沉淀、酶活性測定等蛋白研究。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

2. 將蛋白提取的時間縮短至 30 分鐘-1 小時。

3. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4. 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

5. 蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。

6. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液

體灑落。

2. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于

低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

5. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

6. Western 實(shí)驗(yàn)內(nèi)參可以選用 Lamin A、Lamin B、TBP、Histon H3。

二、操作步驟

1. 提取液準(zhǔn)備：

每200ul冷的蛋白提取液B中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。磷酸酶抑制劑可以一次加入。

2) 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2. 2、樣本解凍后，取適量組織樣本用手術(shù)jian刀盡可能剪碎，加冷 PBS，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。

【注】：

1) 細(xì)胞樣本直接按下面的第四步驟開始操作。

3. 勻漿液在4℃，1000×g條件下離心3分鐘，棄上清，收集沉淀。

4. 每20-40ul細(xì)胞沉淀體積中加入200ul冷的提取液A，高速渦旋振蕩 15 秒或吹打混勻，置2-8℃條件振蕩20-30分鐘。

【注】：

1) 提取液A 處理后細(xì)胞體積應(yīng)減少，否則延長提取液A 振蕩處理時間。

2) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動即可。

3) 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

4) 或者按每20-50mg 組織重量加200 μl 試劑A。

5. 在4℃，2000×g條件下離心10分鐘，棄上清，收集沉淀。

6. 在沉淀中加入80-200ul冷的蛋白提取液B，高速渦旋振蕩15秒。

【注】：

1) 提取液用量根據(jù)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞數(shù)量情況調(diào)整，細(xì)胞數(shù)量多則多加。也可根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)時最終蛋白濃度實(shí)際情況調(diào)整。

2) 加提取液B 前，必須盡可能吸干提取液A。否則會影響核蛋白純度。

3) 對核蛋白純度要求較高時，也可以用PBS 將沉淀洗滌一次。PBS 重懸沉淀，2000×g 離心5 分鐘后收集沉淀再加提取液B。

7. 置2-8℃條件振蕩30-40分鐘。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動即可。

2) 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

3) 此步驟蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時會出現(xiàn)少量透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的蛋白復(fù)合物。不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)即可；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理，300w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，不必進(jìn)行超聲處理。如果引入其他外源性蛋白質(zhì)不影響下游實(shí)驗(yàn)的話，也可以加入DNase處理。

8. 在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。

9. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。

10. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請選取幾個樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

凍存樣本核蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

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