土壤過(guò)氧化氫酶（Solid-Catalase，S-CAT）試劑盒說(shuō)明書

微量法 100 管/48 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

S-CAT 是土壤微生物代謝的重要酶類，在 H2O2 清除系統(tǒng)中具有重要作用。

測(cè)定原理：

H2O2 在 240nm 下有特征吸收峰，通過(guò)測(cè)定與土壤反應(yīng)后溶液在此波長(zhǎng)下吸光度的變化，即可反應(yīng)

S-CAT 活性的高低。

土壤過(guò)氧化氫酶試劑盒   土壤系列-常備現(xiàn)貨

試劑組成和配制：

試劑一：液體 300μl×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 29.7ml 蒸餾水充分溶解后待用；用不完的試劑 4℃

保存；

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 1ml 蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑 4℃保存（如出現(xiàn)結(jié)晶析出，60℃-90℃水浴溶解后使用）。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

自備儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）和蒸餾水。

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干，過(guò) 30~50 目篩。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 240nm，蒸餾水調(diào)零。

2、測(cè)定前務(wù)必準(zhǔn)備 96 孔UV 板一塊（UV 板不是普通酶標(biāo)板，普通酶標(biāo)板只能透過(guò)可見(jiàn)光，不能透過(guò)紫外光，檢測(cè)波長(zhǎng)小于 340nm 務(wù)必使用UV 板）。

3、加樣表。

注意事項(xiàng)

每個(gè)測(cè)定管要設(shè)一個(gè)無(wú)基質(zhì)管，無(wú)土管只要做一管。

S-CAT 活性計(jì)算：

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

單位的定義：每天每g 風(fēng)干土樣催化 1μmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

計(jì)算公式：S-CAT（μmol/d/g）＝[(A 無(wú)土管-A 測(cè)定管+A 無(wú)基質(zhì)管)×V 反總÷（ε×d）×10⁶]÷W÷T=16.5×（A 無(wú)土管-A 測(cè)定管+A 無(wú)基質(zhì)管）

V 反總：反應(yīng)體系總體積，3×10^-4 L；ε：過(guò)氧化氫摩爾消光系數(shù)，4.36×10⁴ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm； T：反應(yīng)時(shí)間，20 min=1/72d； W：樣本質(zhì)量，0.03g。

b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

單位的定義：每天每g 風(fēng)干土樣催化 1μmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

計(jì)算公式：S-CAT（μmol/d/g）＝[(A 無(wú)土管-A 測(cè)定管+A 無(wú)基質(zhì)管)×V 反總÷（ε×d）×10⁶]÷W÷T=33×（A 無(wú)土管－A 測(cè)定管+A 無(wú)基質(zhì)管）

V 反總：反應(yīng)體系總體積，3×10^-4 L；ε：過(guò)氧化氫摩爾消光系數(shù)，4.36×10⁴ L / mol /cm；d：96 孔板光徑，0.5cm； T：反應(yīng)時(shí)間，20 min=1/72d； W：樣品質(zhì)量，0.03g。

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