蔗糖合成酶（合成方向；SS-Ⅱ）試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法 100 管/48 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

蔗糖是源（葉片等）光合產(chǎn)物向“庫(kù)"器官運(yùn)輸?shù)闹饕螒B(tài)。蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是雙向反應(yīng)酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代謝的關(guān)鍵酶之一。研究其合成方向SS-Ⅱ的活性對(duì)于植物蔗糖合成具有重要意義。

測(cè)定原理：

SS-Ⅱ催化游離果糖與葡萄糖供體 UDPG 反應(yīng)生成蔗糖，蔗糖與間苯er酚反應(yīng)可呈現(xiàn)顏色變化，在480nm 下有特征吸收峰，酶活力大小與顏色的深淺成正比。

蔗糖合成酶（合成方向；SS-Ⅱ）試劑盒

組成：

試劑二：1000μg/ml 蔗糖溶液 10ml×1 瓶，4℃保存；試劑五：液體 6ml×1 瓶，4℃避光保存；

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、離心機(jī)、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰

樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 480nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定(在EP 管中加入下列試劑）：

混勻，25℃準(zhǔn)確水浴 10min

沸水浴中煮沸 10min 左右（蓋緊，以防止水分散失），冷卻

混勻，沸水浴 30min，冷卻后，取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中，480nm 下測(cè)定各管吸光值。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只要做一管。每個(gè)測(cè)定管需要設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

SS-Ⅱ活性計(jì)算

1、按照蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。

SS-Ⅱ活性(μg /min/mg prot)= C 標(biāo)準(zhǔn)管×V1×（A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×

（A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷Cpr 2、按照樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。

SS-Ⅱ活性(μg /min/g 鮮重) = C 標(biāo)準(zhǔn)管×V1×（A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×

（A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，1000μg/ml；V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.01ml； V2：加入提取液體積，1ml； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g；T ：反應(yīng)時(shí)間：10min。

蔗糖合成酶（合成方向；SS-Ⅱ）試劑盒