Script IV RT MasterMix

( Perfect for qPCR )

Script IV RT MasterMix 反轉(zhuǎn)錄試劑

目錄號:71618

產(chǎn)品內(nèi)容

保存條件

-20℃保存，有效期 12 個月。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

產(chǎn)品簡介

Script IV RT MasterMix采用第四代高達60℃的全新高溫逆轉(zhuǎn)錄酶，可以通讀GC含量豐富，二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板，極大提高了逆轉(zhuǎn)錄效率，CT值一般提早2-3個循環(huán)。

5x RT Mix IV為一管式逆轉(zhuǎn)錄預(yù)混液，含有逆轉(zhuǎn)錄所需的所有試劑（Script IV Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dTPrimer、dNTP Mixture、RT Buffer），并且，針對qPCR進行特別優(yōu)化oligodT和N6隨機引物配比，使cDNA合成可從RNA轉(zhuǎn)錄本的各個區(qū)域起始并具有相同的逆轉(zhuǎn)錄效率，zui大程度保證了qPCR結(jié)果的真實性和可重復(fù)性。

適用范圍

第一鏈cDNA合成，尤其高GC含量，復(fù)雜模板的cDNA合成。可用于高拷貝、低拷貝基因的檢測。

注意事項

1． 避免RNase污染。

2． 為保證反轉(zhuǎn)錄成功，建議使用高質(zhì)量的RNA樣品。

3． 5x RT Mix IV含有甘油比較粘稠，容易吸附在管壁和吸頭外，導(dǎo)致?lián)p失， 使用前請點甩離心后取用。 5x RT Mix IV包含的酶過量，即使每次分別按照3.8 μl使用，也不影響使用效果。

4． 20 μl逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系建議加入不超過1μg的Total RNA。如果目的基因的表達量非常低，最多加入5 μg Total RNA，否則，RNA量過高，可能會超出后續(xù)qPCR的線性范圍。

5． 本產(chǎn)品適用于包含Ploy (A)結(jié)構(gòu)的真核生物mRNA和不包含Ploy (A)結(jié)構(gòu)的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不適用于miRNA等小RNA模板。

6． 如果模板具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)或高GC區(qū)域，推薦使用變性步驟，即在操作步驟之前，將模板RNA在65℃孵育5 min后迅速轉(zhuǎn)移到冰上，再加RNA模板和RNase free H2O，混勻，50°C孵育15 min進行逆轉(zhuǎn)錄。

第一連 cDNA 合成 (以 20 μl 反應(yīng)體系為例)

重要提示：操作前，請將各組分輕彈混勻，點甩離心后置冰上備用。

1． 反應(yīng)體系的配制

于冰上，在PCR管中，加入以下組分：

2． 輕柔吸打混勻，50℃孵育15 min，進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

3． 85°C加熱5 sec，終止反應(yīng)。

逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于qPCR反應(yīng)，或保存于-20°C，并在半年內(nèi)使用；長期存放，請分裝后存于-70°C。

qPCR

建議取1~2μl cDNA產(chǎn)物原液作為20μl qPCR反應(yīng)體系的模板。

如果基因表達量比較高，請根據(jù)實際情況適當(dāng)稀釋cDNA模板后使用。

相關(guān)產(chǎn)品：

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