Script III All-in-one RT Mix With dsDNase

（Perfect for qPCR）

All-in-oneRTMixwithdsDNase 反轉(zhuǎn)錄試劑

目錄號:71710

產(chǎn)品內(nèi)容

保存條件

-20℃保存，有效期 12 個(gè)月。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介

Script III All-in-one RT Mix With dsDNase是Script III RT Kit WithgDNA Eraser的升級版，只需一步操作， 僅需15分鐘就可以同時(shí)完成基因組清除與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，操作方便快捷，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物兼容染料法和探針法qPCR，用于檢測高拷貝或低拷貝基因。

本品采用第三代高效逆轉(zhuǎn)錄酶和熱敏型dsDNase，針對qPCR進(jìn)行特別優(yōu)化oligo dT和N6隨機(jī)引物配比，使cDNA合成可從RNA轉(zhuǎn)錄本的各個(gè)區(qū)域起始并具有相同的逆轉(zhuǎn)錄效率，zui大程度保證了qPCR結(jié)果的真實(shí)性和可重復(fù)性。

其中5 x All-in-one RT Mix為一管式逆轉(zhuǎn)錄預(yù)混液，含有逆轉(zhuǎn)錄所需的所有試劑（Script III Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、OligodT Primer、dNTP Mixture、RT Buffer）。

注意事項(xiàng)

1． 避免 RNase 污染。

2． 為保證逆轉(zhuǎn)錄成功，建議使用高質(zhì)量的 RNA 樣品。

3． 20μl 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系建議加入不超過 1μg 的 Total RNA。如果目的基因的表達(dá)量非常低，最多加入 5μg Total RNA，否則，RNA 量過高，可能會超出后續(xù) qPCR 的線性范圍

4． 本產(chǎn)品適用于包含 Ploy (A)結(jié)構(gòu)的真核生物 mRNA 和不包含 Ploy (A)結(jié)構(gòu)的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不適用于miRNA等小 RNA 模板。

5． 5x All-in-one RT Mix 和 dsDNase 含有高濃度甘油，比較粘稠，容易吸附在管壁和吸頭外，導(dǎo)致?lián)p失，用前請點(diǎn)甩離心后取用。5x All-in-oneRT Mix 和 dsDNase 內(nèi)包含的酶過量，即使每次分別按照 3.8 μl、0.9 μl使用，也不影響使用效果。

6． 建議使用 0.2ml RNase-free PCR 管在冰上配制反應(yīng)液，并用 PCR 擴(kuò)增儀精準(zhǔn)控溫。

第一連 cDNA 合成 (以 20 μl 反應(yīng)體系為例)

重要提示：操作前，請將各組分輕彈混勻，點(diǎn)甩離心后置冰上備用。

1． 反應(yīng)體系的配制

于冰上，在PCR管中，加入以下組分：

用移液器輕輕吸打，充分混勻，點(diǎn)甩離心收集至管底。

2． 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

① mRNA模板來源于真核細(xì)胞(植物、動物)，含有Poly(A)尾結(jié)構(gòu)：42℃孵育15min；

② mRNA模板來源于原核細(xì)胞(細(xì)菌)、病毒，不含Poly(A)尾結(jié)構(gòu)：25℃孵育10min；42℃孵育15 min。

注意：如果模板具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)或高GC區(qū)域，設(shè)置反應(yīng)程序：

42°C孵育2 min（去除gDNA），50°C孵育15 min (逆轉(zhuǎn)錄)，有助于提高產(chǎn)量。

3． 終止反應(yīng)

85°C加熱5 sec，失活RTase和gDNA Eraser。

逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于qPCR反應(yīng)，或保存于-20°C，并在半年內(nèi)使用；長期存放，請分裝后存于-70°C。

qPCR

建議取1~2μl cDNA產(chǎn)物原液作為20μl qPCR反應(yīng)體系的模板。如果基因表達(dá)量比較高，請根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)稀釋cDNA模板后使用。

相關(guān)產(chǎn)品：

71519 2x SYBR Green qPCR Mix (同TB Green Premix Ex Taq)

71600 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

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91013 通用型總RNA快速提取試劑盒（動物、植物、細(xì)菌、真菌、酵母）

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