諾博萊德 Universal Total RNA Kit通用型總 RNA 提取試劑盒

通用型總RNA快速提取試劑盒

目錄號(hào)：91013

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無(wú)水乙醇

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

采用 Trizol 試劑與離心吸附柱結(jié)合提取總RNA的方法，簡(jiǎn)化了RNA提取的流程，與經(jīng)典的異丙醇沉淀法相比，柱式純化方法簡(jiǎn)便，去除雜質(zhì)能力更強(qiáng)，大大提高了 RNA 的純度。該試劑盒可從各種細(xì)胞或組織（動(dòng)物、植物、血液）中快速提取總 RNA，每個(gè)吸附柱每次可處理 50-100 mg 組織或 5×10⁶ 細(xì)胞，可同時(shí)處理大量不同樣品。一個(gè)小時(shí)內(nèi)即可完成反應(yīng)，提取的總RNA沒(méi)有 DNA 和蛋白的污染，可用于 Northern Blot、Dot Blot、PolyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護(hù)分析和分子克隆。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. RNA 純度更高；

2. 應(yīng)用廣泛：可提取多種不同的樣本材料。

3. 本公司生產(chǎn)的 Universal Total RNA Kit 質(zhì)量?jī)?yōu)異，可以wan美替代 Thermo的 TRIzol Plus RNA Purfication Kit。

4. 可在常溫下提取 RNA，不需要 4℃離心機(jī)；亦可以兼容 4℃離心機(jī)。

注意事項(xiàng)

1. RNA 在裂解液 RL 中時(shí)不會(huì)被 RNase 降解，但后續(xù)處理過(guò)程中應(yīng)使用不含RNase的吸頭和玻璃器皿，璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在 0.5 M NaOH 中浸泡 10 min，然后用水che底洗凈，再高壓滅菌。

2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)影響 RNA 的提取得率和質(zhì)量。

3. 樣品加入裂解液 RL（RNAzol）勻漿后，加氯仿前，樣品可在–80℃保存一個(gè)月以上。

4. 取 RNA 樣本時(shí)，把新鮮組織樣本浸入 RNAsafe (RNA 樣品保存液，91115-100)中，可在 37℃保存一天，在 25℃保存一周，在 4℃保存一個(gè)月，在-20℃或者–80℃長(zhǎng)期保存。

操作步驟

第一次使用前，請(qǐng)先在漂洗液 RW 中加入zhi定量無(wú)水乙chun，詳見(jiàn)瓶上的標(biāo)簽。

提示：所有離心步驟均可在室溫（15~37℃）下進(jìn)行，提取效果更佳！

1. 材料處理：

a．組織（動(dòng)物、植物、真菌）：將組織在液氮中磨成細(xì)粉。每 30~50 mg 動(dòng)物組織加 1ml 裂解液RL，每50~100 mg植物/真菌組織加 1ml 裂解液RL，渦旋 15sec。樣品體積不應(yīng)超過(guò)裂解液RL體積的10%。

b．單層貼壁培養(yǎng)細(xì)胞：吸去培養(yǎng)液，加入適量裂解液RL，每 10cm2 加1ml裂解液RL，用移液器抽打幾次。

c． 細(xì)胞懸液：離心收集細(xì)胞，棄上清，每 5×10⁶ 個(gè)細(xì)胞加1ml裂解液RL。加裂解液 RL 前不要洗滌細(xì)胞，以免降解mRNA。

d．血液：取新鮮血液，加入5倍體積裂解液RL，（推薦0.2ml血液+1 ml 裂解液 RL ），充分振蕩混勻。

2. 將勻漿樣品在室溫下放置 5 min，使得核酸蛋白復(fù)合物wan全分離。

3. 可選步驟：12,000 rpm 離心 5 min，轉(zhuǎn)移上清至一新的離心管中。

（注意：如果樣品中含有較多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物結(jié)節(jié)部位等可加此步驟離心去除，離心得到的沉淀中含有細(xì)胞外膜、多糖、高分子 DNA 等，RNA 存在于上清液中）

4. 向上清（或裂解液混合液）中加入等體積的無(wú)水乙醇，混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)沉淀，每次將≤750 ul 溶液和沉淀一起轉(zhuǎn)入RNA吸附柱中，12,000rpm離心1 min，倒棄濾液，若一次不能轉(zhuǎn)移wan全，可分次轉(zhuǎn)移。

5. 向吸附柱內(nèi)加入500 ul 去蛋白液 RE，12,000 rpm 離心 1 min，倒棄

濾液。

6. 向吸附柱內(nèi)加入500ul漂洗液RW，12,000rpm離心1 min，棄濾液。

（注意：請(qǐng)檢查漂洗液 RW 中是否已按要求加入無(wú)水乙醇?。?

7. 重復(fù)步驟 6 一次。

8. 將RNA吸附柱放回空收集管中，12,000 rpm 離心 2min，甩干膜上殘

留的乙醇。

9. 取出RNA吸附柱，放入一個(gè)新的RNase-Free 1.5 ml 離心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加50~100ul RNase-Free ddH₂O，室溫放置2min，12,000 rpm離心1 min，管底即RNA 溶液。

10. 提取的RNA可直接用于下游實(shí)驗(yàn)，或于-70℃保存，以防降解。

相關(guān)產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71711-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有 qPCR 儀)

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