諾博萊德 ATPase染色試劑盒(鈣鈷法)，ATPase Stain Kit(Calcium-Cobalt Method)

ATPase染色試劑盒(鈣鈷法)   酶類染色

產(chǎn)品貨號：G0168

產(chǎn)品名稱：ATPase染色試劑盒(鈣鈷法)，ATPase Stain Kit(Calcium-Cobalt Method)

產(chǎn)品規(guī)格：5*50ml

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：ATPase染色試劑盒(鈣鈷法)

英文名稱：ATPase Stain Kit(Calcium-Cobalt Method)

規(guī)格：5*50ml

儲存條件：2-8℃，避光保存，有效期6個月。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder G0168 ATPase染色試劑盒(鈣鈷法)，ATPase Stain Kit(Calcium-Cobalt Method)產(chǎn)品介紹

三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphatase，ATPase)是一種水解酶，是催化ATP合成的一種酶。三磷酸腺苷酶根據(jù)所用激活劑、抑制劑以及酶定位的不同分為膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、線粒體三磷酸腺苷酶等。ATPase能水解三磷酸腺苷為磷酸腺苷和磷酸，此酶只作用于磷酸與磷酸之間的高能鍵，因而釋放大量能量。其催化反應(yīng)如下： A-P-P-P + H2O→A-P-P + H3PO4 +能量。

 三磷酸腺苷酶染色試劑盒(鈣鈷法)原理在于肌球三磷酸腺苷酶（mATPase）水解三磷酸腺苷為二磷腺苷和磷酸的反應(yīng)具有pH依賴性，進而利用不同pH對mATPase活性的影響來進行肌纖維分型染色區(qū)分。

自備材料：

1%氯化鈣溶液

操作步驟：(僅供參考)

本試劑盒不建議使用固定后樣本染色。如需固定或脫水不可使用含乙醇、甲醇或丙酮以及磷酸鹽成分輔助試劑。染色結(jié)果如需長期儲存可在顯色還原前使用水基固定液固定。

切片預(yù)處理

1. 冰凍切片滴加少許37℃預(yù)熱的酸/堿預(yù)孵育液覆蓋組織復(fù)溫1min。（具體酸堿孵育液選擇同步驟2）

2. 一張切片滴加堿性預(yù)孵育液孵育15min，傾去多余液體。另一張切片入酸性預(yù)孵育液孵育5min，稍傾去后滴加堿性預(yù)孵育液孵育30s，傾去多余液體。

染色步驟

3. 孵育過程中按照1：49的比例混勻底物儲備液和染色緩沖液制備ATPase染色工作液，置于37℃預(yù)熱， 即配即用。用量根據(jù)組織大小分配100-200ul/組織切片即可。

4. 預(yù)孵育后的切片滴加預(yù)熱的ATPase染色工作液，37℃孵育30-45min。

5. 1%氯化鈣處理3次，每次1min，每次處理后傾去多余液體，不可大力沖洗。

6. 滴加適量Co溶液覆蓋切片3min，蒸餾水浸洗4次每次3min。

7. 在上述過程中配制顯色工作液，即取適量試劑(E)在通風(fēng)櫥內(nèi)用蒸餾水稀釋50倍，即為顯色工作液， 即配即用。切片入顯色工作液孵育1-2min至切片呈均勻黑褐色。流水洗10min或蒸餾水浸洗4次每 次3min。

8. 切片傾去多余水分后使用預(yù)熱融化的甘油明膠封片劑封片后光學(xué)顯微鏡觀察。

注意事項：

1. 切片入ATPase染色工作液前后不可用水沖洗。

2. 若要鑒別肌纖維所屬類型，最好用連續(xù)冰凍切片，同時注意避免切片在孵育和染色過程中干燥變形。

3. 配好的ATPase底物儲備液易失效，建議配好后分裝成小份置于-20℃保存，可保存至少1年。2-8℃冰箱可保存至少1月，室溫放置建議3天內(nèi)使用完畢，不建議反復(fù)凍融。配好的ATPase染色工作液隨著溶液中沉淀量增加而逐漸失效，配置容器底部觀察到明顯白色沉淀時不可使用，預(yù)熱充分后建議在4-6 小時內(nèi)使用完畢。

4. 顯色液具有腐蝕性和刺激性氣味，應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)小心操作。顯色液易被氧化失效，2-8℃密閉可保存至少6個月，溶液變無色或出現(xiàn)黑色沉淀時不可使用。稀釋后的顯色工作液隨時間推移顏色會逐漸變淺，建議在2小時內(nèi)使用完畢。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

ATPase染色試劑盒(鈣鈷法)   酶類染色

產(chǎn)品訂購信息：

NobleRyder G0168 ATPase染色試劑盒(鈣鈷法)，ATPase Stain Kit(Calcium-Cobalt Method) 5*50ml