諾博萊德 革蘭氏陰性菌蛋白提取試劑盒

革蘭氏陰性菌蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P4996

產(chǎn)品名稱：革蘭氏陰性菌蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：100T / 50T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：革蘭氏陰性菌蛋白提取試劑盒

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P4996 革蘭氏陰性菌蛋白提取試劑盒

革蘭氏陰性菌總蛋白提取試劑盒可以從各種革蘭氏陰性菌菌體中提取總蛋白，可用于純化蛋白的粗品制備及總蛋白制備。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。 并含有蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高質(zhì)量的蛋白提供了保證。 本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。 本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白，可以用于不同的下游應(yīng)用。 本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

革蘭氏陰性菌蛋白提取試劑盒可以從各種革蘭氏陰性菌菌體中提取總蛋白，可用于純化蛋白的粗品制備及總蛋白制備。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白，可以用于不同的下游應(yīng)用。根據(jù)不同的菌液樣本以及不同的培養(yǎng)狀況，每毫升菌液大概可以提得 2-10mg 蛋白。采用 BCA或 Lowry 法進(jìn)行蛋白定量。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于 2D 電泳，如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請(qǐng)使用其他貨號(hào)的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于 2D 電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿機(jī)/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、使用方便，不需昂貴設(shè)備。

2、可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。

3、將蛋白提取的時(shí)間縮短至 1 小時(shí)。

4、采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。

5、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

6、紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

7、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

2. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

5. 本試劑盒中提取液和蛋白酶抑制劑中均不含EDTA，根據(jù)需要可自行加入。

二、革蘭氏陽(yáng)性菌蛋白提?。?/span>

1. 提取液的準(zhǔn)備：

根據(jù)所需要提取的樣本量，每 500 μl 革蘭氏陰性菌蛋白提取液中加入 2 μl 蛋白酶抑制劑混合物和 5 μl 蛋白穩(wěn)定劑，充分混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2. 在 4℃，10000×g 條件下將菌液離心 5 分鐘，棄上清，盡量吸干剩余液體，收集菌體。

3. 用 PBS 洗菌體 2 次。若為冷凍菌體直接進(jìn)行下面操作步驟即可。

4. 按每 50 mg-100 mg 濕重菌體樣本加入 500 μl 蛋白提取液，吹打混勻，4℃條件振蕩 20-30分鐘。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

2) 沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間，中間每隔 10 分鐘用移液器吹打混勻即可。

5. 在 150 w-300 w，10 s 超聲/10 s 間隔條件下冰浴超聲至菌液變清。

【注】：

1) 也可以將提取液 A 置研缽研磨。

2) 若無(wú)超聲和研磨條件，可不超聲/研磨。

3) 將提取液在室溫或 37℃持續(xù)振蕩 30 分鐘，至澄清。

4) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

5) 如果沒(méi)有振蕩條件，可以在室溫或 37℃靜置，稍微延長(zhǎng)提取液處理時(shí)間，中間每隔 10分鐘渦旋振蕩混勻。

6. 在 4℃， 12000×g 條件下將提取液離心 5-10 分鐘。

7. 將上清移入冷的干凈離心管，即得革蘭氏陰性菌蛋白樣品。

8. 將蛋白樣品定量后分裝置于-80℃冰箱備用或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

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