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產(chǎn)品型號：BZ6002廠商性質(zhì)：經(jīng)銷商更新時間：2025-07-18訪 問 量：203維生素 B1（Vitamin B1，VB1）試劑盒說明書
微量法 100T/96S
維生素B1（Vitamin B1）是構(gòu)成脫羧輔酶的主要成分，參與細(xì)胞代謝中的三羧酸循環(huán)，是維持機(jī)體正常代謝必須的水溶性維sheng素，在生物體能量代謝中有重要的作用。
VB1 在堿性條件下還原鐵氰hua鉀生成亞鐵氰hua鉀，亞鐵氰hua鉀與 Fe3+在弱酸條件下生成普魯士藍(lán)，在 704nm 有特征吸收峰。
產(chǎn)品名稱 | BZ6002-100T/96S | Storage |
提取液：液體 | 70ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 1ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 2ml | 4℃ |
試劑三：液體 | 2ml | 4℃避光 |
試劑四：液體 | 5ml | 4℃ |
試劑五：液體 | 3ml | 4℃避光 |
說明書 | 一份 | |
自備儀器和用品：
天平、研缽、離心機(jī)、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)
1. 組織：將樣品磨碎，按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 0.6ml提取液）加入提取液，60℃浸提 30min，加蒸餾水 0.4ml，混勻后于 25℃，16000rpm 離心 10min，取上清測定（動物組織等蛋白含量較高的樣本建議離心 20-30min）。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 0.6ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；加蒸餾水 0.4ml，混勻后于 25℃，16000rpm 離心 10min，取上清測定。
3. 血清：直接測定。
空白管 | 測定管 | |
樣品（μl） | 20 | |
試劑一（μl） | 20 | |
試劑二（μl） | 16 | 16 |
試劑三（μl） | 20 | 20 |
充分混勻，80℃反應(yīng) 10min | ||
提取液（μl） | 16 | 16 |
試劑四（μl） | 44 | 44 |
試劑五（μl） | 24 | 24 |
H2O（μl） | 60 | 60 |
充分混勻，靜置 20min，于微量石英比色皿/96 孔板，蒸餾水調(diào)零，測定 704nm 處吸光值，記為 A 空白管和A 測定管，△A=A 測定管-A 空白管。 | ||
計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.017x+0.0031，R2 = 0.9991；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度：μg/ml；y 為△A（A 測定管-A 空白管）
1. 按照蛋白含量計算
VB1 含量（μg/mg prot）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷Cpr
= 58.8×（△A-0.0031）÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計算
VB1 含量（μg/g 鮮重）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（W÷V 樣總）
= 58.8×（△A-0.0031）÷ W
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計算
VB1 含量（μg/104 cell）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）
= 58.8×（△A-0.0031）÷ 細(xì)胞數(shù)量
4. 按照液體體積計算
VB1 含量（μg/ml）=（△A-0.0031）÷ 0.017
= 58.8×（△A-0.0031）
V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g b．用 96 孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0085x +0.0031，R2 = 0.9991；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度：μg/ml；y 為△A（A 測定管-A 空白管）
1. 按照蛋白含量計算
VB1 含量（μg/mg prot）=（△A -0.0031）÷ 0.0085÷Cpr
= 117.65×（△A-0.0031）÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計算
VB1 含量（μg/g 鮮重）=（△A-0.0031））÷ 0.0085÷（W÷V 樣總）
= 117.65×（△A-0.0031）÷ W
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計算
VB1 含量（μg/104 cell）=（△A-0.0031）÷ 0.0085÷（細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）
= 117.65×（△A-0.0031）÷ 細(xì)胞數(shù)量
4. 按照液體體積計算
VB1 含量（μg/ml）=（△A-0.0031）÷ 0.0085
= 117.65×（△A-0.0031）
V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g
1. 若測定結(jié)果中吸光值超過 2，請將樣本稀釋后進(jìn)行測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
2. 蛋白濃度較高的樣品，比如動物組織，若顯色完成后有沉淀產(chǎn)生，將樣本稀釋后再重新測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3. 顯色完成后立即進(jìn)行測定。
4. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為 0.1-10μg/ml。
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