α-淀fen酶（α-amylase，α-AL）試劑盒

（ 微量法 100T/48S）

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

淀粉水解酶，包括α-淀fen酶和β-淀fen酶。α-AL (EC 3.2.1.1)隨機(jī)催化淀粉中α-1,4-糖苷鍵水解，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖，同時使淀粉的粘度降低，因此又稱為液化酶。

測定原理：

淀粉水解酶催化淀粉水解生成還原糖，還原糖還原 3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)，在 540 nm 有吸收峰；通過測定 540 nm 吸光度增加速率，計算淀fen酶活性。α-AL 耐熱，但是β-淀fen酶可在 70℃鈍化 15min。因此粗酶液經(jīng)過 70℃鈍化 15min，就只有α-AL 能夠催化淀粉水解。

α-淀fen酶試劑盒   淀粉系列-常備現(xiàn)貨

組成：

試劑一：液體 15mL×1 瓶，室溫保存。若有黃色晶體析出，可 90℃加熱溶解后再用。試劑二：液體 7.5mL×1 瓶，4℃保存。若有沉淀析出，可 70℃加熱溶解后使用。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽和蒸餾水。

粗酶液提取:

組織：稱取 0.1~0.2g 樣本（建議稱取約 0.1g 樣本），加 1 mL 蒸餾水勻漿；將勻漿倒入離心管中，在室溫下放置提取 15min，每隔 5min 振蕩 1 次，使其充分提??；3000g，25℃離心 10min，吸取上清液并且加蒸餾水定容至 10 mL，搖勻，即為淀fen酶原液。

血清（漿）：直接檢測。

操作步驟和加樣表（在 EP 管中依次加入下列試劑）：

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長到 540 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、試劑一和試劑二 40℃預(yù)熱 10min。

3、測定步驟：

70℃水浴 15min 左右，流水冷卻。

在 40℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫 5min

混勻，95 度水浴 5min，冷卻，取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中，540nm 處讀取吸光值，計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管需設(shè)一個對照管。

α-淀fen酶活性計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸曲線為y=3.7215x -0.1778； x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

2、α- 淀fen酶活性

（1） 按照樣本質(zhì)量計算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個酶活力單位。

α- 淀fen酶活性(mg/min/g 鮮重)=[(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=1.075×(ΔA＋

0.1778)÷W

（2） 按照蛋白質(zhì)含量計算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個酶活性單位。

α- 淀fen酶活性(mg/min/mg prot)= [(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷（V 樣×Cpr）÷T=0.1075×(ΔA＋0.1778)

÷Cpr

（3） 血清（漿）樣本中α- 淀fen酶活性計算

單位定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個酶活性單位。

α- 淀fen酶活性(mg/min/mL)= [(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷V 樣÷T=0.1075×(ΔA＋0.1778)

反總：反應(yīng)體系總體積，0.15mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.075 mL；V 樣總：提取液總體積，10 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，5min。

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸曲線為y=2.481x -0.1778； x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

2、α- 淀fen酶活性

（1） 按照樣本質(zhì)量計算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個酶活力單位。

α- 淀fen酶活性(mg/min/g 鮮重)=[(ΔA＋0.1778)÷2.481×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=1.612×(ΔA＋

0.1778)÷W

（2） 按照蛋白質(zhì)含量計算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個酶活性單位。

α- 淀fen酶活性（mg/min/mg prot）=[(ΔA＋0.1778)÷2.481×V 反總]÷（V 樣×Cpr）÷T =0.1612×(ΔA＋0.1778)÷Cpr

（3） 血清（漿）樣本中α- 淀fen酶活性計算

單位定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個酶活性單位。

α- 淀fen酶活性(mg/min/mL)= [(ΔA＋0.1778)÷2.481×V 反總]÷V 樣÷T=0.1612×(ΔA＋0.1778)

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.15mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.075 mL；V 樣總：提取液總體積，10 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，5min。

α-淀fen酶試劑盒   淀粉系列-常備現(xiàn)貨