諾博萊德 昆蟲(chóng)膜蛋白提取試劑盒

昆蟲(chóng)膜蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P5010

產(chǎn)品名稱(chēng)：昆蟲(chóng)膜蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱(chēng)：昆蟲(chóng)膜蛋白提取試劑盒

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5010 昆蟲(chóng)膜蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

昆蟲(chóng)細(xì)胞膜蛋白提取試劑盒是一種高效的高產(chǎn)膜蛋白提取試劑盒。本試劑盒提供全套試劑，適用于從昆蟲(chóng)組織或培養(yǎng)細(xì)胞中溫和、高效地抽提膜/跨膜蛋白和膜蛋白復(fù)合物。用本試劑盒抽提和富集到的蛋白包括從分子量很小到很大的蛋白，單次跨膜至 7 次以上的蛋白，甚至一些大的蛋白復(fù)合物。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在 1 小時(shí)內(nèi)完成。提取的膜蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于 2D 電泳，如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請(qǐng)使用其他貨號(hào)的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于 2D 電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。

適用樣本：昆蟲(chóng)

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.使用方便，從昆蟲(chóng)細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過(guò)反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

2.將蛋白提取的時(shí)間縮短至 30 分鐘-1 小時(shí)。

3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4.紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

5.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 7 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

2. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

5. 提取液 A 在使用前須一直置于 2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時(shí)會(huì)導(dǎo)致不容易分層。

6. 膜蛋白電泳時(shí) loading buffer 應(yīng)該避免煮沸。

7. 膜蛋白電泳時(shí)可以提高 loading buffer 的 SDS 含量。

二、操作步驟

1. 提取液制備：

每 500μl 提取液 A 中加入 2μl 蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 提取液 A 在使用前須一直置于 2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時(shí)會(huì)導(dǎo)致不容易分層。

4) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2. 取 50mg 昆蟲(chóng)組織樣本用手shu剪刀盡可能剪碎，加入 500μl 提取液 A 后，用勻漿機(jī)/勻漿器充分勻漿。

【注】：

1) 也可以置于研缽中用液氮研磨。

2) 沒(méi)有液氮也可直接加入提取液 A 后置冰上研磨即可。

3) 樣本數(shù)量根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況調(diào)整，每次的裂解液用量并不是一定的，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整。

由于膜蛋白含量較少，需要較多的組織或細(xì)胞才能保證得率。

3. 將勻漿液移入一個(gè)預(yù)冷的干凈離心管中，在 2-8℃振蕩 1 小時(shí)。

【注】：

1) 必須在 2-8℃條件下處理。

2) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持提取液稍微晃動(dòng)即可。

3) 如果沒(méi)有 2-8℃振蕩條件，也可 2-8℃冰箱靜置 1 小時(shí)，中間每隔 10 分鐘渦旋混勻。

4. 將提取液在 2-8℃低溫下 12000×g 離心 5 分鐘，取上清。

5. 在上清中加入 10μl 提取液 B，充分混勻。

6. 在 37℃水浴 10 分鐘。

7. 在 37℃ 1000×g 離心 3 分鐘。

【注】：

1) 必須在 37℃條件下離心。

2) 沒(méi)有 37℃離心條件也可以不離心，稍微延長(zhǎng) 37℃水浴時(shí)間，至液體澄清，分層清晰。

8. 此時(shí)溶液會(huì)分為 2 層，小心移除上層，留下管底部下層大約 50μl 液體。

【注】：

1) 下層為粘稠狀液體。

9. 用 50-150μl 試劑 C 溶解該溶液，即得膜蛋白樣品。

【注】：

1) 膜蛋白比較難溶解，不能很快溶解混勻，可以在加入溶解液后稍微吹打混勻，然后置于 4℃冰箱靜置至溶解。中途用移液器輕輕吹打混勻一次。靜置后取出再次用移液器稍微吹打混勻即可。

2) 于 4℃靜置直至管底透明膠狀物wan全溶解。

10. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以?xún)?yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

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