IDT NGS二代測序甲基化測序捕獲解決方案

--DNA 甲基化文庫構(gòu)建試劑盒、定制化Panel雜交捕獲探針組

北京云肽生物科技代理的美國IDT NGS二代測序產(chǎn)品，通過基于PostBS單鏈建庫原理的IDT xGen Methy.Seq 甲基化文庫建庫試劑盒、用于雜交捕獲靶向富集的IDT xGen Custom Hyb Panel定制探針組，實(shí)現(xiàn)從低起始量DNA樣本獲得高質(zhì)量的甲基化檢測結(jié)果，同時(shí)提高目標(biāo)區(qū)城覆蓋度并降低檢測成本，為生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)研究提供強(qiáng)大助力。

摘要

在哺乳動(dòng)物表觀遺傳學(xué)研究中，DNA甲基化是研究zui為深入的修飾之一。在正常細(xì)胞中，DNA甲基化可以有效調(diào)控基因表達(dá)水平。但與此同時(shí)，啟動(dòng)子區(qū)城的高甲基化會(huì)引起某些抑癌基因的失活，已有大量實(shí)驗(yàn)研究表明，DNA甲基化在多類癌癥中會(huì)導(dǎo)致大范用基因沉默。當(dāng)然，甲基化水平的改變不僅會(huì)出現(xiàn)在啟動(dòng)子區(qū)域和DNA重復(fù)序列中，它還與非編碼RNA(如腫瘤抑制作用相關(guān)的microRNA)的表達(dá)調(diào)控有關(guān)。

DNA甲基化水平與腫瘤發(fā)生與發(fā)展過程息息相關(guān)，這驅(qū)動(dòng)著人類表觀基因組學(xué)的進(jìn)步。甲基化測序是研究不同生命過程中基因調(diào)控的重要工具之一（例如細(xì)胞分化和疾病進(jìn)展)，并且在包括腫瘤早篩和診斷在內(nèi)的臨床檢測中展現(xiàn)出越來越大的應(yīng)用價(jià)值。全基因組甲基化測序(WGBS)允許無偏好性地進(jìn)行單堿基分辨率檢測，是檢測目標(biāo)區(qū)域的理想方法。在有明確目標(biāo)基因組區(qū)城存在的情況下，經(jīng)過雜交捕獲后再測序會(huì)使測序?qū)嶒?yàn)更有針對(duì)性，成本更為可控。在評(píng)估具有低水平甲基化特征的復(fù)雜樣本時(shí)(如液體活檢中的游離DNA)，測序深度需求一般比常規(guī)全基因組甲基化測序更高，因而，這類樣本的檢測中雜交捕獲是更為理想的實(shí)驗(yàn)方案。

在本應(yīng)用方案中，通過結(jié)合使用IDT xGen Methyl-Seq 建庫試劑盒及IDT xGen Custom HybPanel雜交捕獲系統(tǒng)，打造了兼具高靈活性及高準(zhǔn)確度的甲基化靶向測序工作流程。該流程在實(shí)驗(yàn)端結(jié)合了IDT的單鏈文庫制備技術(shù)和高效穩(wěn)定的雜交捕獲體系，在生信設(shè)計(jì)端則采用了IDT獨(dú)特的探針設(shè)計(jì)算法對(duì)探針的表現(xiàn)進(jìn)行逐條評(píng)估；在本文中展示的測試數(shù)據(jù)證明了該工作流程可應(yīng)對(duì)不同甲基化水平的復(fù)雜樣本，并可高效準(zhǔn)確地還原樣本的原始甲基化特征。

主要特點(diǎn)

·實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中，同時(shí)測試并平行比較了不同甲基化水平的樣本，且panel本身探針數(shù)目較少，相比常規(guī)實(shí)驗(yàn)更加考驗(yàn)探針性能；

·不同甲基化水平文庫都有著較高的比對(duì)率；

·不同甲基化水平文庫有著近似的中靶率、覆蓋度以及覆蓋均一性；

·在120個(gè)堿基的長度區(qū)間內(nèi)，即便對(duì)于CpG高度密集的目標(biāo)區(qū)域，不同甲基化水平下的覆蓋程度也近乎一致。

一、背景介紹

在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，DNA甲基化修飾過程為：胞嘧啶的嘧啶環(huán)第5位碳原子在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的作用下添加甲基基團(tuán)。這類甲基的共價(jià)修飾通常發(fā)生在CpG二核苷酸(dinucleotide)中的胞嘧啶中，該二核苷酸集中在稱為CpG島的基因組區(qū)城中，并且CpG位點(diǎn)常在CpG島上成簇出現(xiàn)。人類基因組中約有2800萬個(gè)CpG位點(diǎn)，正常體細(xì)胞中約70%的CpG位點(diǎn)為甲基化，但是這些CpG位點(diǎn)的分布并不均勻。大多數(shù)CpG島的長度為500-1000個(gè)堿基對(duì)(bp)，通常集中在啟動(dòng)子區(qū)域。

二代測序技術(shù)(Next.generationsequencing，NGS)的快速發(fā)展使得快速繪制任意物種的DNA甲基化圖譜成為可能。全基因組重亞硫酸氫鹽測序(WGBS)已成為在全基因組范圍內(nèi)檢測甲基化水平的金標(biāo)準(zhǔn)，并且對(duì)于不同類型樣本的適配程度很高。但如果想同時(shí)針對(duì)大量樣本的特定區(qū)城進(jìn)行甲基化檢測，WGBS無疑是一個(gè)成本相對(duì)較高的技術(shù)方案。幸運(yùn)的是，雜交捕獲技術(shù)可以在一次反應(yīng)中檢測成千至上百萬個(gè)目標(biāo)基因組序列，因此成為了一種性價(jià)比非常高的解決方案，在成本允許的情況下可以實(shí)現(xiàn)更高的測序深度，賦能多位點(diǎn)甲基化研究。

二、建庫方案-PostBS單鏈建庫方法--IDT xGen Methyl-Seq 建庫試劑盒

傳統(tǒng)甲基化建庫流程，也稱作PreBs(Pre-Bisulfite)方法，即對(duì)PCR擴(kuò)增前的文庫(已連接上測序接頭)進(jìn)行重亞硫酸氫鹽處理。重亞硫酸氫鹽處理會(huì)破壞DNA雙鏈結(jié)構(gòu)并產(chǎn)生片段化文庫，

大大降低文庫的分子復(fù)雜度，影響最終的測序質(zhì)量（如產(chǎn)生較高的冗余率）。為了解決上述難題，重亞硫酸氫鹽處理后再進(jìn)行建庫的技術(shù)方案(Post-Bisulfite，PostBS)逐漸成為主流。在該技術(shù)路線中，以重亞硫酸氫鹽處理后的單鏈或片段化的DNA為初始模板，而轉(zhuǎn)化成可以用于后續(xù)測序的文庫。

IDT xGen Methyl-Seq建庫試劑盒基于Adaptase技術(shù)，該技術(shù)是一種高效旦不依賴于模板的單鏈DNA接頭連接方法，通過這種高效率的連接方式，可以利用重亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化處理后的單鏈及損傷DNA進(jìn)行文庫構(gòu)建。借助于無偏好性的接頭連接，研究者可獲得更完整、偏好性更低的甲基化測序文庫。成本允許的情況下可以實(shí)現(xiàn)更高的測序深度，賦能多位點(diǎn)甲基化研究。

圖.實(shí)驗(yàn)流程示意圖。物理打斷后的基因組DNA經(jīng)過重亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，使用lDT xGen Methyl-Seq 建庫試劑盒進(jìn)行文庫制備。根據(jù)目標(biāo)區(qū)城進(jìn)行探針定制化設(shè)計(jì)，在設(shè)計(jì)時(shí)充分考慮了甲基化測序過程中的序列復(fù)雜性；捕獲實(shí)驗(yàn)中用到的DNA探針為IDT xGen Custom Hyb Panels 探針。

圖,甲基化建庫流程示意圖。物理打斷后的基因組DNA經(jīng)過重亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，使用lDT xGen Methyl-Seq 建庫試劑盒進(jìn)行文庫構(gòu)建。首先，Adaptase反應(yīng)可不依賴于模板而在單鏈DNA3'末端高效加入截短型測序接頭1(P7端)，再通過延伸反應(yīng)，可生成雙鏈并含有部分P7測序接頭的文庫。在下一步的連接反應(yīng)中，加入截短型測序接頭2(P5端)，再通過IndexingPCR反應(yīng)加入樣本標(biāo)簽(sample index)，并擴(kuò)增得到完整長度的文庫，該文庫可用于后續(xù)的WGBS或雜交捕獲反應(yīng)。

三、雜交捕獲方案--IDT xGen Custom Hyb Panel探針

IDT xGen Custom Hyb Panel探針中的寡核苷酸探針在5’端帶有生物素修飾。依托于在工藝中使用的特殊DNA合成設(shè)備，以及在核酸合成領(lǐng)域超過30年的技術(shù)積淀，IDT可以快速、高質(zhì)量地合成捕獲反應(yīng)中所需要的長鏈寡核苷酸探針。以其中的IDT xGen Custom Hyb Panel-Production 探針為例，該panel中的每條探針都單獨(dú)合成且經(jīng)過單獨(dú)質(zhì)檢，在探針混合之前，IDT會(huì)對(duì)每條探針進(jìn)行電噴霧電離質(zhì)譜(ESl-MS)分析和兩次定量，以保證每條高保真探針在panel內(nèi)的濃度相同。相較于傳統(tǒng)的芯片合成結(jié)合PCR擴(kuò)增的探針合成方法，IDT的單條合成、單條質(zhì)檢的探針合成工藝在減少批次間差異、提高探針性能穩(wěn)定性方面具有明顯優(yōu)勢。

常規(guī)的雜交捕獲設(shè)計(jì)在一定程度上允許探針與目標(biāo)位點(diǎn)之間的序列差異，即通常所說的錯(cuò)配容忍度。然而，在捕獲未知甲基化狀態(tài)的DNA模板分子時(shí)，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)面臨如下特殊挑戰(zhàn)：

①針對(duì)特定的目標(biāo)區(qū)域，需要更多的探針序列來應(yīng)對(duì)可能存在的高度復(fù)雜度甲基化狀態(tài)。

②在經(jīng)過堿基轉(zhuǎn)化后，GC含量改變，可能影響探針與靶點(diǎn)結(jié)合能力。

③胞嘧啶脫氨反應(yīng)后，基因組序列的復(fù)雜性也顯著降低，對(duì)探針結(jié)合的特異性要求更高。

與常規(guī)的DNA探針設(shè)計(jì)不同，甲基化檢測設(shè)計(jì)策略需要考慮到不同樣本中目標(biāo)區(qū)域的甲基化水平差異，這是因?yàn)樾枰东@的文庫分子在經(jīng)過重亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化后，從根本上改變了原有的DNA序列。下圖展示了IDT通常推薦使用的甲基化捕獲探針設(shè)計(jì)策略。

圖.甲基化雜交捕獲探針設(shè)計(jì)策路。首先，針對(duì)目標(biāo)區(qū)城OT(Original top strand，正義鏈)及OB(Original botom strand，反義鏈)，假設(shè)都為非甲基化狀態(tài)，經(jīng)過重鹽硫酸氫鹽處理及PCR后，OT序列變成Cony.OT(Converted top strand)，其中非甲基化的C堿基變成T堿基，RCOT(Reverse complement stands of OT)即為捕獲OT鏈的探針設(shè)計(jì)序列(5’TACACAAT3’)。反之，經(jīng)過重鹽硫酸鹽處理及PCR后，OB席列變成Conv.OB(Converted bottom strand)，其中ROCB(Reverse complement strands of OB)序列即為OB鏈的探針設(shè)計(jì)序列(5'ATCACATA3’)。同樣原理，假設(shè)OT及OB序列都為甲基化狀態(tài)，經(jīng)過重亞硫酸氫鹽處理及PCR后，OT序列變成Conv-OT(Converted top strand)，并且甲基化的C堿基仍保持不變，ROCT(Reverse complement strands of OT)序列即為捕獲OT鏈的探針設(shè)計(jì)序列(5’TACGCGAT3’）。反之，經(jīng)過重亞硫酸氫鹽處理及PCR后，OB序列變成Conv-OB(Converted botom strand),其中RCOB (Reverse  complement strands of OB)序列即為捕獲OB鏈的探針設(shè)計(jì)序列 (5’ATCGCGTA 3’)。

四、案例研究--不同探針設(shè)計(jì)策略對(duì)于關(guān)鍵測序指標(biāo)參數(shù)的影響

為了評(píng)估不同探針設(shè)計(jì)方案(僅針對(duì)正義鏈或同時(shí)針對(duì)正義鏈和反義鏈設(shè)計(jì)探針)和針對(duì)目標(biāo)區(qū)城不同tiling硬蓋層數(shù)(1x、2x或者4x)對(duì)于整體檢測結(jié)果的影響，用起始量統(tǒng)一為50ng人基因組DNA，制備兩個(gè)梯度的甲基化樣本來模擬不同甲基化水平的樣本情況。該兩個(gè)梯度文庫使用來自wan全甲基化和wan全非甲基化的DNA標(biāo)準(zhǔn)品組合(Zymo Cat.No.D5014-2，D5014-1)，模擬分別為15%及85%的全基因組甲基化水平。DNA樣本經(jīng)過物理打斷后，使用Zymo EZ DNA Methylation Gold Kit (Zymoo Cat.No.D5005)進(jìn)行重亞硫酸氫鹽處理，該試劑盒將未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)換為尿嘧啶，得到長度為170~200bp且以單鏈為主的DNA片段。文庫制備使用lDT xGen Methyl-Seq 建庫試劑盒(IDT Cat. 10009824)，之后每個(gè)文庫取500ng用于雜交捕獲(3-plex)，且按照IDT xGen Custom Hvb Panels探針說明書標(biāo)準(zhǔn)流程進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作(65℃過夜雜交)。上機(jī)測序平臺(tái)為|||umina NextSeq(2x75bp讀長，混入10% phiX)。去除10bp

Adaptase反應(yīng)所產(chǎn)生的“tail“后，使用Bismark(v0.22.3)和Picard(v2.18.9)進(jìn)行數(shù)據(jù)比對(duì)及甲基化水平分析。數(shù)據(jù)量均一化至2M reads/樣本進(jìn)行分析。

比較四種不同探針設(shè)計(jì)方式對(duì)相同128Kb目標(biāo)區(qū)域的捕獲效果，如表所示，“Panel 1T"及“Panel2T"代表只針對(duì)目標(biāo)區(qū)城DNA序列的正義鏈進(jìn)行設(shè)計(jì)，并且分別使用1x平鋪或者2x高密度設(shè)計(jì)；“Panel1TIB"及“Panel2T2B"代表針對(duì)目標(biāo)區(qū)城DNA序列的正義鏈及反義鏈同時(shí)進(jìn)行設(shè)計(jì)，并且分別使用2x平鋪(正義鏈及反義鏈各為1x平鋪)及4x高密度設(shè)計(jì)(正義鏈及反義鏈各為2x高密度設(shè)計(jì))。

表.針對(duì)相同目標(biāo)區(qū)域的不同探針設(shè)計(jì)策略

數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示上述四種Panel設(shè)計(jì)有著近似的比對(duì)率、中靶率、Fold-80、轉(zhuǎn)化效率值。其中，提高探針覆蓋密度對(duì)于關(guān)鍵測序指標(biāo)的提升影響并不顯著("Panel 1T"vs"Panel 2T"或者“Panel 1TIB"Vs“Panel 2T2B");同樣的，僅針對(duì)正義鏈設(shè)計(jì)1X探針覆蓋即可達(dá)到與同時(shí)設(shè)計(jì)正反義鏈探針近似的結(jié)果

表.四種Panel設(shè)計(jì)策略的性能比較

五、IDT甲基化方案驗(yàn)證--材料與方法

為了檢測IDT靶向甲基化測序方案在不同基因組位點(diǎn)、不同甲基化狀態(tài)下對(duì)甲基化區(qū)域的捕獲效果，IDT仍然選擇較小的目標(biāo)區(qū)間進(jìn)行探針設(shè)計(jì)和測試（總目標(biāo)區(qū)域大小約為100kb)。在本文第4部分“案例研究--不同探針設(shè)計(jì)策略對(duì)于關(guān)鍵測序指標(biāo)參數(shù)影響"的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，不同探針平鋪密度的Panel 1T1B(正義鏈及反義鏈名為1x平鋪)及Panel 2T2B(正義鏈及反義鏈各為2x高密度設(shè)計(jì))有著近似的測序指標(biāo)，因此在進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證中采用“Panel ITIB"探針設(shè)計(jì)策略。

在實(shí)驗(yàn)中，人基因組DNA的起始量統(tǒng)一為50ng，并使用相同的wan全甲基化和wan全非甲基化的DNA標(biāo)準(zhǔn)品組合，制備以低甲基化水平為主的五個(gè)甲基化水平的模擬樣本(0%、5%、10%、50%、90%)。樣本制備過程中，使用Covaris M220將不同甲基化水平(均為50ng)的DNA樣本打斷至320bp，經(jīng)過重亞硫酸氫鹽處理(Zymo EZ DNA Methylation-Gold Kit)，文庫制備使用lDT xGen Methyl-Seq 建庫試劑盒(IDT Cat, 10009824)，按照該試劑合說明書中“Appendix A:Protocol adjustments for targeted hybridization capture"部分所述，調(diào)整磁珠純化比例及PCR循環(huán)數(shù)(13個(gè)循環(huán))，最終得到1.5-2ug文庫產(chǎn)量。之后，每個(gè)文庫取500ng用于雜交捕獲(5-plex)，

并且按照說明書標(biāo)準(zhǔn)流程進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作(65℃過夜雜交)。在NovaSeq平臺(tái)采用PE150進(jìn)行測序，測序數(shù)據(jù)均一化到單樣本約1Gb數(shù)據(jù)量。

六、IDT甲基化方案驗(yàn)證--結(jié)果

為了驗(yàn)證IDT甲基化測序方案的整體性能，針對(duì)所有測試樣本的測序性能指標(biāo)進(jìn)行逐一評(píng)估，包括比對(duì)率(mappingrate)、覆蓋均一性、甲基化水平等。

6.1文庫質(zhì)控結(jié)果

使用樣本起始量均為50ng的基因組DNA標(biāo)準(zhǔn)品(物理打斷前)，經(jīng)重亞硫酸氫鹽處理后，使用IDT xGen Methyl-seq 建庫試劑盒進(jìn)行文庫構(gòu)建，根據(jù)該試劑盒說明書"Appendix A：Protocol adjustments for targeted hybridization capture"部分中的建議，捕獲前PCR循環(huán)數(shù)設(shè)置為13個(gè)循環(huán)，文庫產(chǎn)量及濃度結(jié)果見表(使用Qubit進(jìn)行DNA定量)：

表.捕獲前文庫濃度及產(chǎn)量結(jié)果

文庫大小分布影響最終關(guān)鍵測序指標(biāo)的評(píng)估，因此需保證有著不同甲基化水平的五個(gè)模擬文庫有著近似的文庫大小分布(309-328bp)。下圖中，A-E分別對(duì)應(yīng)甲基化水平為0%、5%、10%、50%、90%的五個(gè)雜交捕獲前(Pre-hyb)文庫大小分布結(jié)果，F(xiàn)則展示了在雜交捕獲后的文庫大小分布(5-plex)。如下圖所示，在捕獲前后文庫(Post-Hyb)中均沒有明顯的非特異峰，與預(yù)期相符。

圖.Pre-Hyb及Post-Hyb文庫大小分布圖

6.2 數(shù)據(jù)分析結(jié)果(比對(duì)率、目標(biāo)甲基化水平、覆蓋均一性)

比對(duì)率

比對(duì)率反映了樣本的測序數(shù)據(jù)和參考基因組之間的相關(guān)性，可以衡量測序的整體準(zhǔn)確性以及是否在實(shí)驗(yàn)中引入DNA污染，對(duì)比率越高則代表準(zhǔn)確性越好。如下圖所示，即便是理論上低甲基化水平的樣本，基因組比對(duì)率也高于92%。

圖.不同甲基化水平文庫比對(duì)率結(jié)果

不同樣本不同位點(diǎn)的甲基化水平可能千差萬別，為了評(píng)估甲基化雜交捕獲方案是否可以正確體現(xiàn)不同的甲基化水平，對(duì)模擬不同甲基化水平的標(biāo)準(zhǔn)品文庫予以進(jìn)一步分析，實(shí)際檢測到的甲基化水平符合預(yù)期。

覆蓋均一性

覆蓋均一性是靶向測序中最重要的性能參數(shù)之一，顯示了測序數(shù)據(jù)針剛目標(biāo)區(qū)城的覆蓋度分布情況。其現(xiàn)出有多少目標(biāo)區(qū)城可以達(dá)到所需的分析要求，覆蓋度越均一，意味著測序數(shù)據(jù)在目標(biāo)區(qū)城上分配的更平均，從而節(jié)省了測序數(shù)據(jù)量。常用于評(píng)估覆蓋均一性的指標(biāo)包括:Fold-80，即為保證80%的目標(biāo)堿基達(dá)平均深度所需的額外測序倍數(shù)，計(jì)算公式為:Fo1d.80=平均深度/80%以上的目標(biāo)區(qū)域覆蓋深度，在相同的捕獲效率下，F(xiàn)old.80越低，則測序數(shù)據(jù)浪費(fèi)越少。0.2x平均測序深度比例(0.2×mean coverage)，即為高于0.2×平均測序深度的目標(biāo)區(qū)城測序覆蓋度占比。在相同的目標(biāo)區(qū)域及測序數(shù)據(jù)量下，覆蓋度越均勻，高于0.2×平均測序深度的比例越高越好。如下圖所示，不同甲基化水平樣本有著近似的Fold-80及高于0.2×平均測序深度的比例。

圖.不同甲基化水平文庫Fold-80及0.2×平均測序深度比例圖

對(duì)于覆蓋困難區(qū)域，可以通過IGV軟件可視化地查看及比較不同區(qū)域覆蓋度情況，這對(duì)比較不同甲基化水平樣本的表現(xiàn)尤為必要。下圖展示了FAM135B基因的部分區(qū)地游蓋傳況。FAMI358基因是頭頸部鱗癌(HNSCC)的常用甲基化分子標(biāo)記物、如圖所示，在不同甲基化水平下(從上至下依次為，5%、50%、90%)，多個(gè)樣本在7條探針?biāo)采w區(qū)域中有著近似的覆蓋深度。除此之外，在7條探針?biāo)鶎?duì)應(yīng)的120bp目標(biāo)序列窗口中，其包含的CpG位點(diǎn)數(shù)量眾多，分別為12個(gè)、14個(gè)、14個(gè)、16個(gè)、21個(gè)、19個(gè)和12個(gè)，但即便在高CpG密度和高GC含量的情況下，依然獲得了理想的覆蓋均一度。

圖.IGV軟件顯示位于FAM13B基因的7根探針，其所對(duì)應(yīng)區(qū)域中有著近似的覆蓋深度

七、總結(jié)

基于IDT xGen Methyl-Seq 建庫試劑盒與IDT xGen 定制甲基化捕獲panel，，IDT提供了高性價(jià)比的精確靶向甲基化測序解決方案。靶向富集技術(shù)的引入，在提升目標(biāo)區(qū)域測序深度的同時(shí)減少了測序成本，使得甲基化定向分析的效率大幅提高。在分享的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)案例中，使用了更具挑戰(zhàn)性的小區(qū)域(~100Kb)進(jìn)行驗(yàn)證。分析結(jié)果證明，該實(shí)驗(yàn)方案能準(zhǔn)確地檢測目標(biāo)區(qū)域的DNA甲基化水平，對(duì)于模擬不同甲基化水平的標(biāo)準(zhǔn)品樣本，其測序數(shù)據(jù)的比對(duì)率、覆蓋均一性等關(guān)鍵指標(biāo)均展現(xiàn)出穩(wěn)定且優(yōu)異的性能。IDT甲基化靶向捕獲方案覆蓋了甲基化測序?qū)嶒?yàn)中關(guān)鍵的建庫和捕獲步驟，是表觀遺傳學(xué)研究和生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)的有力工具。

北京云肽生物科技代理的IDT NGS甲基化測序相關(guān)產(chǎn)品