諾博萊德 總蛋白提取試劑盒（蛋白相互作用適用（Pull-down、co-IP等））

總蛋白提取試劑盒(蛋白相互作用)常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號：P4953

產(chǎn)品名稱：總蛋白提取試劑盒（蛋白相互作用適用（Pull-down、co-IP等））

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：總蛋白提取試劑盒（蛋白相互作用適用（Pull-down、co-IP等））

規(guī)格：50T ; 100T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P4953 總蛋白提取試劑盒（蛋白相互作用適用（Pull-down、co-IP等））

適用樣本：動物細(xì)胞/組織

產(chǎn)品介紹

總蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代培養(yǎng)動物細(xì)胞和各種動物實(shí)體組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等動物組織樣品中提取總蛋白。配合其他試劑時，也可以用于植物、細(xì)菌、真菌、酵母等樣品的總蛋白提取。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器 膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋 白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Pull-down、IP 等蛋白相互作用研究，也可以用于 WB、蛋白質(zhì)電泳、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白，下游應(yīng)用范圍廣，提取液裂解細(xì)胞 的能力較溫和，需要根據(jù)實(shí)際樣本情況優(yōu)化裂解時間。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒按每個處理樣本 50 mg 細(xì)胞/組織計(jì)（大約 50 μl 細(xì)胞沉淀體積），如果需要處理大量的細(xì)胞/組織，將提取液按細(xì)胞體積的 1：10 加入細(xì)胞沉淀即可。每個 50T 試劑盒大約 可以提取 2.5 g 細(xì)胞/組織樣本的總蛋白。根據(jù)不同的細(xì)胞類型，100 mg 細(xì)胞沉淀物（107 個 細(xì)胞）的總蛋白質(zhì)產(chǎn)量大約為 6mg 左右。

使用前請注意：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿機(jī)/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

2. 提取過程簡單方便，將蛋白提取的時間縮短至30min-1h。

3. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4. 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

5. 總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。

6. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、PepstatinA、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

操作步驟：

一、使用注意事項(xiàng)

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請選取幾個樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

7. 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

8. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

9. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

10. Western Blot實(shí)驗(yàn)內(nèi)參可以選用beta-actin、GAPDH、Tubulin。

二、懸浮細(xì)胞總蛋白提取

1. 提取液準(zhǔn)備：

每500μL冷的總蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物和2μL磷酸酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 細(xì)胞蛋白提取

(1) 取5×106個細(xì)胞，在4℃，2500×g條件下離心5min，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干收集細(xì)胞。

(2) 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

(3) 每5×106—1×107個細(xì)胞（大約50mg細(xì)胞/50μL細(xì)胞沉淀體積）中加入500μL冷的總蛋白提取液，吹打混勻后，在4℃條件下振蕩20-30min，至細(xì)胞充分裂解，無明顯細(xì)胞沉淀。

(4) 在4℃，12000×g條件下離心15min。

(5) 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到總蛋白。

(6) 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

三、貼壁細(xì)胞總蛋白提取

1. 提取液準(zhǔn)備：

每500μL冷的總蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物和2μL磷酸酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 細(xì)胞蛋白提取

(1) 小心吸取貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液。

(2) 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

(3) 加入適量冷的總蛋白提取液，振蕩15-30min，至細(xì)胞充分裂解，用細(xì)胞刮刀刮一遍，將裂解液吸入另一干凈離心管。

(4) 在4℃，12000×g條件下離心15min。

(5) 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到總蛋白。

(6) 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

四、組織樣本總蛋白提取

1. 提取液準(zhǔn)備：

每500μL冷的總蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物和2μL磷酸酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 組織蛋白提取

(1) 取50-100mg組織樣本，用PBS洗干凈，然后用手術(shù)jian刀盡可能剪碎，加入500μl總蛋白提取液，用組織勻漿器/勻漿機(jī)勻漿至無明顯肉眼可見固體。

(2) 將組織勻漿吸入一預(yù)冷的干凈離心管中，在4℃條件下振蕩10-20min。

(3) 在4℃，12000×g條件下離心15min。

(4) 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到總蛋白。

(5) 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：

1. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

3. 實(shí)驗(yàn)完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

總蛋白提取試劑盒(蛋白相互作用)常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品訂購信息：

P4953  總蛋白提取試劑盒（蛋白相互作用適用（Pull-down、co-IP等））  50T/100T