諾博萊德  CCK-8試劑盒(細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)試劑盒)CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit

CCK-8試劑盒   細(xì)胞功能檢測(cè)-常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：CA9098

產(chǎn)品名稱：CCK-8試劑盒(細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)試劑盒)CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit

英文名稱：CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：10*1000T/10*500T/1000T/100T/500T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

別名：CCK-8 WST-8

儲(chǔ)存條件：4℃密封避光

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyderCA9098  CCK-8試劑盒(細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)試劑盒)CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit  是一種基于 WST-8的快速、高靈敏度細(xì)胞活性檢測(cè)的試劑盒，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測(cè)。WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性甲臜化合物。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同種類型細(xì)胞，顏色深淺與細(xì)胞數(shù)量在一定限度內(nèi)呈線性關(guān)系。

本試劑盒為即用型溶液，無(wú)需再行配制，可直接用于96孔板細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，省略了細(xì)胞洗滌與收集等步驟。該試劑盒可用于細(xì)胞因子等誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖檢測(cè)，也可用于抗癌藥物等對(duì)細(xì)胞有毒試劑誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性檢測(cè)，或一些藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制檢測(cè)。

操作步驟：（僅供參考）

一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。

2.按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組3-6個(gè)復(fù)孔。

3.接種后培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁，然后加CCK-8溶液培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定OD值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)（X軸），OD值為縱坐標(biāo)（Y軸）的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4.根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量（試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時(shí)間。）

二、細(xì)胞活性檢測(cè)

1.在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100µL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（在37℃，5%CO2的條件下）。

2.向培養(yǎng)板加入10µL不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段時(shí)間（例如：6、12、24或48小時(shí)）。

 3.向培養(yǎng)板加入10µL不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段時(shí)間（例如：6、12、24或48小時(shí)）。向每孔加入10µLCCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響 OD 值的讀數(shù)）。如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8溶液之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。

 4.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)，用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。

 5.如果暫時(shí)不測(cè)定 OD 值，可以向每孔中加入10µL0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

活力計(jì)算：

細(xì)胞活力（％）=[A(加藥)－A(空白)]／[A(0 加藥)－A(空白)]×100

A（加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A（空白）：具有培養(yǎng)基和 CCK-8溶液而沒(méi)有細(xì)胞的孔的吸光度

A（0加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8溶液而沒(méi)有藥物溶液的孔的吸光度

細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力

注意事項(xiàng)：

1.本試劑顏色應(yīng)為粉紅色，如果發(fā)現(xiàn)溶液變黃應(yīng)棄用。

 2.由于使用96孔板進(jìn)行檢測(cè)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，一定要注意蒸發(fā)問(wèn)題。由于96孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加相同量的PBS、水或培養(yǎng)液。

 3.本試劑盒的檢測(cè)依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，所以還原劑(例如一些抗氧化劑)會(huì)干擾檢測(cè)，如果待檢測(cè)體系中存在較多的還原劑，需設(shè)法去除。

 4.建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間，白細(xì)胞可能培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)。

 5.當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的最小接種量至少為1000個(gè)/孔 (100µL培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于2500 個(gè)/孔 (100µL培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。

 6.如果沒(méi)有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490nm之間的濾光片，但是450nm檢測(cè)靈敏度最高。

 7.培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí)，通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會(huì)對(duì)檢測(cè)造成影響。

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