諾博萊德 Tris-Tricine-SDS-PAGE 凝膠試劑盒套裝

Tris-Tricine-SDS-PAGE凝膠試劑盒套裝 凝膠

產(chǎn)品貨號(hào)：P9109

產(chǎn)品名稱：Tris-Tricine-SDS-PAGE 凝膠試劑盒套裝

產(chǎn)品規(guī)格：10T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：Tris-Tricine-SDS-PAGE 凝膠試劑盒套裝

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品介紹

常規(guī)的 Tris-SDS-PAGE 電泳只能分辨大分子蛋白，對(duì)于相對(duì)分子量小的，尤其是 10 kD 以下的蛋白分辨率極低。而 Tricine-SDS-PAGE 可以很好的分離分子量在 1-10 kD 的蛋白及多肽，成為目前電泳法變性分離多肽的主要方法。本產(chǎn)品包括 Tricine-SDS- PAGE 凝膠制備所需全套試劑，只需自備蒸餾水，即可制備各種濃度的高質(zhì)量凝膠，方便、快捷，電泳后可直接用于考染、銀染、Western雜交等實(shí)驗(yàn)。

本產(chǎn)品配套的蛋白 Marker 包含預(yù)染的 3 種多肽和 2 種低分子量蛋白質(zhì)組成，分子量范圍為3.3kD-31.0kD，可用于直接觀察蛋白質(zhì)電泳狀況以及清晰地判斷 Western Blot 的轉(zhuǎn)膜效果。經(jīng) Tricine甘油-SDS-PAGE凝膠電泳時(shí)以及轉(zhuǎn)移到 PVDF 或 NC 膜上可看到清晰的 5 條藍(lán)色的蛋白條帶。本品為蛋白質(zhì)和多肽混合物的凍干粉，每種預(yù)染蛋白含量約為 40µg，配有一支 1×上樣緩沖液。本產(chǎn)品配套的 2x 上樣緩沖液 (含 DTT)適用于 Tricine-SDS-PAGE 電泳時(shí)作蛋白質(zhì)上樣用。其主要成份為 SDS，DTT，考馬斯亮藍(lán)，緩沖鹽溶液等。考馬斯亮藍(lán)用作電泳時(shí)的指示劑，可大概指示電泳結(jié)束的時(shí)間。

使用方法：

準(zhǔn)備：

1. 本產(chǎn)品所提供的 PAGE 膠凝固劑為固體粉末，使用前加入雙蒸水溶解即配制成 10% PAGE 膠凝 固劑溶液（0.1gPAGE 膠凝固劑加 1mL 雙蒸水），將溶液分裝后置于-20℃保存，通常半年內(nèi)有效。溶液在使用中可放置 4℃保存兩周。

2. 電泳緩沖液：

（1）陰極緩沖液制備：取一包 10×Tris-tricine-SDS-PAGE 電泳緩沖液（陰極-）粉末充分溶解于 500mL 去離子水中，配成 10×Tris-tricine-SDS-PAGE 電泳緩沖液（陰極-）儲(chǔ)存液，4℃保存?zhèn)溆?，使用前?釋 10 倍后使用。

（2）陽極緩沖液制備：根據(jù)用量取適量 10×Tris-tricine-SDS-PAGE 電泳緩沖液（陽極-），稀釋 10 倍后使用。

3. 取出蛋白 Marker，溶于 200 µ1 配套的 1×上樣緩沖液，可根據(jù)需要進(jìn)行小量分裝，每管 10 µl， -20℃貯存，每次取一管使用，避免反復(fù)凍融。使用前取分裝后的小管室溫融化后即可上樣電泳。

制膠：

根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的 PAGE 分離膠配制濃度，凝膠濃度配方參考附表。

I 配制分離膠

1. 將不同體積的雙蒸水、49.5%T 6%C 、凝膠緩沖液和甘油加入到離心管中混合。

2. 加入 10% PAGE 膠凝固劑和 PAGE 膠促凝劑，立即渦旋混勻 5-10 秒，以使溶液充分混勻。

3. 在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液（1 mm mini-gel，分離膠溶液加約 4 mL ），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層 1-3 cm 的水層，使凝膠表面保持平整。

4. 靜置，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。

II 配制夾層膠

1. 去除覆蓋在分離膠上的水層，用濾紙將殘留的水盡量吸去。

2. 將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C 和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。

3. 加入 10% PAGE 膠凝固劑和 PAGE 膠促凝劑，立即渦旋混勻 5-10 秒，以使溶液充分混勻。

4. 將適量的夾層膠溶液迅速加至分離膠的上面（對(duì)于 1 mm 的 mini-gel，夾層膠溶液加約 1 mL ）， 然后在夾層膠溶液上輕輕覆蓋一層水層，使凝膠表面保持平整。

5. 靜置，待夾層膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。

III 配制濃縮膠

1. 去除覆蓋在夾層膠上的水層，用濾紙將殘留的水吸去。

2. 將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C 和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。

3. 加入 10% PAGE 膠凝固劑和 PAGE 膠促凝劑，立即渦旋混勻 5-10 秒，以使溶液充分混勻。

4. 將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。

5. 待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，以免破壞加樣孔。

6. 進(jìn)行電泳操作。

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