諾博萊德 細(xì)胞膜/胞漿/核蛋白分步提取試劑盒

細(xì)胞膜/胞漿/核蛋白分步提取試劑盒常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P4940

產(chǎn)品名稱：細(xì)胞膜/胞漿/核蛋白分步提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：細(xì)胞膜/胞漿/核蛋白分步提取試劑盒

規(guī)格：50T ; 100T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P4940 細(xì)胞膜/胞漿/核蛋白分步提取試劑盒

細(xì)胞膜蛋白/胞漿蛋白/核蛋白提取試劑盒適用于從各種原代或傳代細(xì)胞中分步提取膜蛋白/胞漿蛋白/核蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

適用樣本：動(dòng)物細(xì)胞

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

細(xì)胞膜/胞漿/核蛋白分步提取試劑盒適用于從各種原代或傳代細(xì)胞中分步提取膜蛋白/胞漿蛋白/核蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿機(jī)/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過(guò)研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

2、將蛋白提取的時(shí)間縮短至 1 小時(shí)。

3、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4、紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

5、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半an氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

7. 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測(cè)，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過(guò)程保持低溫操作，縮短離心時(shí)間。

8. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

9. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

二、操作步驟

1. 提取液準(zhǔn)備：

每 400ul 冷的蛋白提取液 A/B/D 中都分別加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物和 2ul 磷酸酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2．取 5-10×10⁶個(gè)細(xì)胞，在 4℃，800×g 條件下離心 5-10 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干。

3. 用冷 PBS 洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4. 每 5×10⁶個(gè)細(xì)胞中加入 400ul 冷的蛋白提取液 A，混勻后，在 4℃條件下用試劑盒所配針筒反復(fù)吸吹細(xì)胞，使細(xì)胞wan全破裂。

5. 在 4℃，1000×g 條件下離心 5 分鐘。

6. 將上清(I)吸入另一干凈離心管，在沉淀中加入 100-200μl 冷的提取液 B，高速渦旋振蕩 15 秒，充分混勻。

7. 將混勻的提取液 B 置 4℃低速振蕩 30-40 分鐘。

8. 在 4℃，12000×g 條件下離心 10 分鐘。將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。

9. 在步驟 6 中所得到的上清(I) 中加入 8ul 提取液 C，充分混勻。

10. 在 2-8℃振蕩 20-30 分鐘。

11. 在 37℃水浴 10 分鐘。

12. 在 37℃下 1000g 離心 3 分鐘，此時(shí)溶液分為兩層，上層是胞漿蛋白部分，下層部分 (II) 是膜蛋白約為 40-50μl。

13. 將上層小心吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白。

14. 用 50-100μl 冰冷的提取液 D 溶解步驟 12 中的下層部分(II)，即得膜蛋白。

15. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

常見(jiàn)問(wèn)題分析：

1. 蛋白濃度低？

處理部分樣本時(shí)可能沒(méi)有裂解wan全，導(dǎo)致核蛋白/膜蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑 BC 的處理時(shí)間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒(méi)有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

膜蛋白豐度較低，在條件允許的情況下，需要盡可能加大細(xì)胞的上樣量。

2. 用什么方法定量蛋白？

建議用 BCA 法。不適合用 Bradford 法，因?yàn)樵噭?A 中含有干擾 Bradford 法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過(guò)透析處理或者用脫鹽柱改換過(guò)緩沖體系，則可以用 Bradford 法定量。

3. 提取時(shí)出現(xiàn)膠狀沉淀？

核蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時(shí)會(huì)出現(xiàn)少量透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組 DNA 等的復(fù)合物。不檢測(cè)和基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)即可；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過(guò)超聲處理，300w/10秒間隔 10 秒，超聲 3 分鐘，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。檢測(cè)一些常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄因子，例如NF-kappaB、p53 等時(shí)，不必進(jìn)行超聲處理。

注意事項(xiàng)：

1. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

3. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

5. 如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應(yīng)立即用水沖洗。

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